وبلاگ

S

 

S

 

S

 

S

 

S

 

 

 

۵۱۷

 

S

 

S

 

S

 

S

 

S

 

S

 

 

 

۳۰۷

 

S

 

S

 

S

 

S

 

S

 

S

 

 

 

R: Resistance
S: Sensitive
۴-۷. نتایج تعیین غلظت پروتئین­ها
پس از اینکه مرحله استخراج پروتئین­ها به پایان رسید، پروتئین­ها تعیین غلظت گردید. برای این کار از روش برادفورد، به وسیله دستگاه اسپکتوفوتومتر با طول موج ۵۹۵ نانومتر استفاده شد. قبل از آن باید منحنی استاندارد را رسم نمود. از پروتئین آلبومین سرم گاوی به عنوان پروتئین استاندارد جهت سنجش غلطت استفاده شد، به نحوی که ۱ این پروتئین آماده گردید و برای صحت این مقدار، توسط دستگاه اسپکتوفوتومتر در طول موج ۲۸۰ نانومتر جذب مشاهده شد، سپس رقت­های مختلف از آن آماده گردید و با روش برادفورد آنها تعیین غلظت شد. بدین ترتیب منحنی استاندارد ترسیم و جذب نوری ترکیب مجهول قرائت شد و در منحنی استاندارد قرار گرفت و بدین ترتیب غلظت مجهول تعیین شد.

از دستگاه اسپکتروفتومتر مدلspectrophotometer JENWAY 6305 استفاده شد. استاندارد سازی با پروتئین آلبومین انجام شد، غلظت پروتئین استاندارد با کمک فاکتور XF در دستگاه ثبت شد و سپس غلظت نمونه­های مجهول در طول موج­های ۲۸۰ و ۵۹۵ نانومتر سنجیده شد.
غلظت پروتئین­های غشایی بین ۷۰-۴۰ میلی­گرم بر میلی­لیتر و غلظت پروتئین­های ترشحی بین ۵-۱ میلی گرم بر میلی­لیتر گزارش شد.
نمودار۴-۲: منحنی استاندارد
۴-۸. نتایج مربوط به تفکیک پروتئین­ها بر اساس وزن مولکولی
جهت جداسازی پروتئین­ها از ژل پلی اکریل امید با غلظت­های مختلف ۱۰% و ۵/۱۲% و ضخامت ۱ میلی متر استفاده شده، طی محاسبات حدود ۲۵ میکروگرم از هر نمونه استفاده شد و از هر دو نوع رنگ­آمیزی کوماسی بلو R-250 و Blue Silver Staining استفاده شد.
شکل شماره ۴-۵ متعلق به پروتئین­های غشایی سویه­های بیماران مایکوباکتریوم توبرکلوزیس حساس و مایکوباکتریوم بوویس می­باشد بنحوی که lineهای ۱ تا ۵ مربوط به سویه مایکوباکتریوم بوویس و lineهای ۶ تا ۱۰ مربوط به سویه مایکوباکتریوم توبرکلوزیس حساس می­باشد.
درصد ژل ۱۰% و رنگ آمیزی آمیزی کوماسی بلو R-250 استفاده شده است.

 

 

• TB M. bovis مارکر

 

 

شکل۴-۵: باندهای پروتئین­های غشایی سویه­های M.bovis و M.TB، استخراج پروتئین به روش آمونیوم سولفات، ژل ۱۰% و رنگ آمیزی آمیزی کوماسی بلو R-250
شکل شماره ۴-۶ نیز متعلق به پروتئین­های غشایی می­باشد که درصد ژل ۱۰% اما از رنگ­آمیزیBlue Silver Staining استفاده شده است، بنحوی که lineهای ۲ تا ۶ مربوط به سویه مایکوباکتریوم بوویس و lineهای ۷ تا ۱۱ مربوط به مایکوباکتریوم توبرکلوزیس حساس می­باشد.

 

 

• TB B. bovis